نقش پل نمکی در سطح در دسترس باقیمانده های آمینواسیدی آنزیم α -آمیلازb. amyloliquefaciens (baa) و اثر آن بر پایداری حرارتی با ایجاد فشردگی موضعی

در آنزیم α -آمیلاز (baa)b. amyloliquefaciens ، رزیدیوهای 185 – 177 (ناحیه i یا لوپ) سازندة بخشی از محفظة (cage) مسئول اتصال به کلسیم هستند. لوپ موجود در baa دارای دو رزیدیو بیشتر از همتای ترموفیل خود یعنی α -آمیلاز (bla) b. licheniformis می باشد و رزیدیوی arg176 موجود در این بخش با glu126 از ناحیة ii (رزیدیوهای 131 – 118) ایجاد یک پل نمکی می کند که این ارتباط در آنزیم bla به واسطة جایگزینی های r176q، e126v حذف گردیده است و از سویی پایداری حرارتی آنزیم baa به میزان زیادی به یون کلسیم وابسته است. در این تحقیق، اثر پل نمکی در پایداری حرارتی آنزیم بررسی گردید و برای مشخص شدن اهمیت ساختاری و عملکردی پل نمکی مذکور، ابتدا مدل مولکولی آنزیم δe126 به طریقة تئوری ساخته شد و در ادامه موقعیت و اثرات رزیدیوهای دو منطقه i و ii از طریق برنامه های getarea و what if مورد بررسی قرار گرفت و سپس جهش فوق به وسیلة جهش زایی هدفمند در ژن baa ایجاد شد و پایداری حرارتی آنزیم جهش یافته و وحشی با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج حاصل از مدل مولکولی نشان داد که حذف پل نمکی از طریق اثر بر رزیدیوهای آبدوست و آبگریز موجود در دو منطقه i و ii باعث افزایش نفوذ پذیری آنزیم به آب می گردد ونا پایداری حرارتی آنزیم جهش یافته نیز نتایج فوق را تأیید کرد. بنابراین وجود پل نمکی از طریق کاهش نفوذپذیری آنزیم به آب، مانع خروج کلسیم و غیرفعال شدن حرارتی آنزیم می گردد.